Početak projekta: 1.10.2025.

Citomegalovirus (CMV) u stanici domaćina opsežno  remodelira unutarstanične membrane stvarajući odjeljak za sklapanje virusnih čestica (engl. assembly compartment; AC). Mehanizam nastanka AC-a se intenzivno istražuje, obzirom da razumijevanje slijeda događaja nužnih za njegovo sklapanje može doprinijeti razvoju novih antivirusnih terapija koje ciljaju proteine domaćina (engl. host directed-aniviral therapy). Dosadašnja istraživanja na humanim i mišjim virusima (HCMV i MCMV) ukazuju na važnost preformatiranja endosomalnih odjeljaka, posebice tubularnih sortirajućih endosoma (TSE). Naši rezultati pokazuju da je perinuklearno nakupljanje Rab10 pozitivnih tubularnih membrana jedan od prvih biljega stvaranja AC, čemu prethodi aktivacija SNX27:Retromer:ESCPE-1 kompleksa. Za mobilizaciju Rab10 na membrane AC-a ključna je i prisutnost njegovog efektora, proteina EHBP1. U ovom projektu bismo se dalje fokusirali na ulogu Rab10-Rab8-Rab11 petlje u procesu ekstenzivne tubulacije membrana unutrašnjeg dijela AC-a. Na MCMV inficiranim fibroblastima BioID metodom bismo identificirali koji od proteina ove mreže ulazi u interakcije s Rab10. Potom, u cilju rasvjetljavanja prostorno-vremenskog slijeda aktivacije ovih malih GTPaza i njihovih efektora, nakon siRNA utišavanja, odnosno transfekcije stanica konstruktima s DN učinkom, pratili bismo učinkovitost nastanka AC. Dinamiku ekspresije Rab10, Rab8 i Rab11 GTPaza na ekstendiranim tubulima pratili bismo in vivo DHTM mikroskopijom na NIH3T3 staničnim linijama s inducibilnom ekspresijom GFP Rab10, GFP Rab8 i GFP Rab11 proteina. U konačnici, nakon identifikacije proteina X koji se aktivira na TSE nakon Rab10, odredili bismo njegov interaktom pomoću BioID metode, ali i utvrdili značaj na replikacijski ciklus virusa. Time bismo doprinijeli razumijevanju procesa kojima CMV regrutira stanične proteine distalno od Rab10 kako bi nastali izrazito ekstendirani tubuli koji kasnije najvjerojatnije služe kao platforma za konačno omatanje viriona.