Početak projekta: 1.10.2025.

Humani citomegalovirus (HCMV), važan humani patogen koji inficira većinu populacije, ekstenzivno preuređuje membranski sustav stanice i stvara veliku strukturu poznatu kao odjeljak za sklapanje viriona (engl. assembly compartment, AC). Razvoj AC odvija se sličnim slijedom u stanicama inficiranim mišjim CMV-om (MCMV). Za razliku od HCMV-a, gdje se AC razvija od 24 do 72 sata nakon infekcije, temeljna konfiguracija AC (preAC) u stanicama inficiranim s MCMV-om uspostavlja se brzo, u razdoblju 5-7 sati nakon infekcije. To omogućuje uspostavljanje tehnički prikladnijih eksperimentalnih pristupa u nastojanju da se odgovori na pitanje kako nastaje AC, jedno od ključnih pitanja za razumijevanje biologije i patogeneze CMV infekcije na koje se pokušava odgovoriti u posljednjih 25 godina.

Od nedavno dostupan kodirajući potencijal MCMV-a pokazuje da 170 gena izražava 380 virusnih transkripata. U ranoj fazi infekcije prije uspostavljanja preAC, izražavaju se  34 (β1) i 55 (β2) transkripta u dva slijedna vala. Cilj ovoga projekta je uporabom kontroliranog izražaja β1 i β2 gena, delecijskih mutanti MCMV-a i siRNA identificirati virusni gen koji izaziva nastanak preAC (virusni transkript za preAC, VT-preAC). Biogeneza preAC pratit će se imunofluorescencijom, konfokalnom i digitalnom holotomografskom (DHTM) mikroskopijim kao dislokacija Golgijeva kompleksa i tubulacija endosomalnog sustava. Produkt identificiranog VT-preAC će se detaljno karakterizirati biokemijski i funkcionalno. Transfekcijom VT-preAC će se izazvati slična konfiguracija u neinficiranim stanicama a sa shRNA za VT-preAC i siRNA za virusne gene istražit će se uloga M48, M94 i M103 u biogenezi AC.  GFP-VT-preAC će se koristiti za snimanje na živim stanicama DHTM-om i analize s markerima membranskog sustava. VT-preAC-BioID2 će se koristiti u BioID testu i maseno-spektrometrijsku identifikaciju staničnih proteina s kojim VT-preAC stupa u interakciju (interaktom) kako bi se identificirao mehanizam biogeneze preAC i AC.